Nat Biomed Eng：新突破！DNA编辑可恢复遗传性视网膜疾病损害的视觉功能！

肾病脑干疟疾（IRD）是由250多种不同基因组的性状惹来的一组致盲性疟疾。Leber一族先天性黑蒙症（LCA）是IRD最常见的一种，多数LCA病征在整个儿童时期都会有致使的视力持续性，随着脑干的透过性变性，老年时则会全然失明。目前尚不高效的治疗选择。

2017年，美国政府食品药品监督管理局（FDA）许可了第一种针对RPE基因组里不具双等位基因组性状的LCA病征的基因组疗法，即使用腺无关病毒（AAV）将正确的RPE65基因组传送到脑干里履行职责动态。外科试验指出，治疗第一年光影动态有所改善，但长时间效果会攀升。分析执法人员猜测这可能是由于AAV多种形式的投递的转基因组解读素质随时间攀升了，或者RPE65复合物欠缺惹来的脑干变性对外东光解读的RPE65复合物消除了持续性。

2020年10月19日，来自美国政府加利福尼亚大学和凯斯西储大学的分析工作团队在《Nature Biomedical Engineering》上发表了新书Restorationof visual function in mice with an inherited retinal disease via adeninebase editing的分析成果，其利用腺嘌呤DNA主编器（ABE），借助了CRISPR-Cas9系统的脱靶性状、低主编效赴援等持续性，成功补救基因组性状，稳定下来了患有肾病脑干疟疾的成年大鼠的光影动态。

分析执法人员以RPE65基因组的3号外显子上再次发生单DNA性状，导致该可再生11-反式视黄醛和视色素的复合物很难解读的rd12大鼠作为LCA外科无关仿真透过分析。其首先在活体蛋白里审计了以同东光重组修复（HDR）的方式将实现对性状位点的修复，结果发现HDR的效赴援仅为0.03%，不能稳定下来RPE65的动态和改善疟疾特异性。

之后，分析执法人员尝试向脑干下投递ABE，通过将RPE65基因组互补链上的A转换为G的方式将，以来得佳的精度和最小的脱靶赴援来补救该病理性状。其设计出密码子优化后的类似于sgRNA-A5，sgRNA-A6的ABE值得注意（ABEmax），并通过rd12蛋白系测试了ABE的密码子优化可以消除来得稳定和来得佳的复合物解读，ABEmax不具来得强的DNA主编效赴援，可以最小的脱靶赴援补救无古义性状。

活体测试ABE对Rpe65性状可视赴援

然后分析执法人员生产了三种慢病毒多种形式，将sgRNA和ABEmax通过注射投递至大鼠脑干的色素上皮层（RPE）该组织透过解读，以审计该DNA主编方法的解毒。注射五周后，分析执法人员通过复合物质免疫印迹法检测了检视和对照大鼠眼里RPE65复合物的稳定下来情况。结果发现，类似于sgRNA-A5，sgRNA-A6的ABEmax的检视使大鼠成功解读了定位正确的RPE65复合物。对每只嘴巴的补救蛋白总和透过分析，发现A5和A6检视分别补救了32％和17%的蛋白。

脑干下投递ABE可以补救rd12大鼠的性状，稳定下来RPE65的解读

为了全面性量化其补救效赴援，分析执法人员对大鼠RPE该组织里分离的DNA透过了高通量脱氧核糖核酸。指出，sgRNA-A5的ABEmax检视的仅次于补救赴援可高达29％，sgRNA-A6的ABEmax仅次于补救赴援里低11％。通过基因外环状DNA脱氧核糖核酸（CIRCLE- seq）对sgRNA-A5和A6的脱靶活性透过审计，结果并未检测到对照RPE该组织的历史背景素质以上的脱靶主编。

然后分析执法人员检测了补救效赴援来得佳的A5检视的rd12大鼠到底可以稳定下来动态性光影循环，以全面性审计DNA主编的治果。结果发现，经A5检视的rd12大鼠嘴巴在全然黑暗适应后显示出11-反式视黄醛的大量填充，光影周期再次稳定下来，且新填充的11-反式视黄醛可在闪光刺激后尽快光异构化为全反式视黄醛，消除光影。此外，该基因组主编检视的大鼠也被测试了可以稳定下来其脑干蛋白和光影动态，从脑干到初级光影皮层的光影移动式的动态完整性以及皮层反应也给予了稳定下来。

DNA主编后rd12大鼠光影周期和脑干动态的稳定下来

该分析的通讯创作者Krzysztof Palczewski表示：“在这项概念测试分析里，我们提供了基因组主编在补救惹来肾病脑干疟疾的性状和稳定下来光影动态方面的外科潜力的证据。在接受基因组主编治疗后，我们分析的大鼠可以根据方向，大小，对比度以及时空频赴援来区分光影变化，这些结果颇为令人鼓舞，这代表着肾病脑干疟疾治疗方法的重大进步”。

原始出处：Susie Suh, Elliot H Choi, Henri Leinonen, et al.Restoration of visual function in mice with an inherited retinal disease via adenine base editing.Nat Biomed Eng. 2020 Oct 19. doi: 10.1038/s41551-020-00632-6.